2026年2月4日，中國農業科學院農業質量標準與檢測技術研究所王瑞國團隊聯合中國農業大學、河北獸藥飼料監察所等單位在期刊《Toxins》上發表題為" Simultaneous Quantification of Fumonisins and Their Hydrolyzed Metabolites in Donkey Plasma, Urine, and Feces Using LC-MS/MS: A Novel Method for Toxicokinetic and Exposure Assessment Studies "的研究論文。

該研究從暴露組學視角出發，首次建立並全麵驗證了一種可同時定量驢血漿、尿液和糞便中三種伏馬菌素及其水解代謝物的LC-MS/MS方法。

針對不同生物基質的複雜性，研究團隊分別優化了鹽析輔助液-液萃取與稀釋-蒸發-進樣等前處理策略，並引入黄瓜视频APP下载免费直播金剛1000溶劑蒸發工作站實現高通量、快速的樣品濃縮處理。該方法為驢這一重要經濟物種的真菌毒素內暴露水平解析與毒代動力學研究提供了關鍵分析工具，填補了相關領域的方法空白。

金剛1000溶劑蒸發工作站

研究背景

伏馬菌素（FBs）是一類廣泛汙染玉米及其加工副產品的真菌毒素，其中FB₁、FB₂、FB₃毒性最強，可通過抑製鞘脂代謝引發動物多種疾病，馬科動物尤為敏感。在動物體內，伏馬菌素可水解生成水解伏馬菌素（HFBs），與母體毒素共同存在於血漿、尿液和糞便中，是評估真菌毒素內暴露水平的關鍵生物標誌物。

驢作為重要的經濟物種，其日糧易受伏馬菌素汙染，但關於驢體內伏馬菌素的毒代動力學研究幾乎空白。從暴露組學視角出發，實現對多種生物基質中母體化合物及其代謝物的同步精準檢測，是開展暴露評估與毒代動力學研究的前提。然而，現有分析方法多針對單一基質、代謝物覆蓋不全，且前處理複雜耗時，驢生物基質中更無同時檢測FBs和HFBs的驗證方法。

因此，建立一種簡便、靈敏、適用於驢血漿、尿液和糞便的FBs及HFBs同步定量方法，具有重要的科學意義與應用價值。

結果與討論

一、MS參數優化

為最大化靈敏度與特異性，研究對質譜參數進行了係統優化。通過直接進樣比較ESI正負兩種電離模式，結果顯示：伏馬菌素（FBs）在兩種模式下均可電離，但ESI⁺模式信號強度較ESI⁻高出逾一個數量級；水解伏馬菌素（HFBs）僅在ESI⁺模式下可檢測。因此，本研究選擇ESI⁺模式進行後續分析。

根據SANTE指南要求，為每個分析物選擇兩個特征離子對用於多反應監測（MRM）。值得注意的是，FB₂/FB₃和HFB₂/HFB₃兩對位置異構體具有相同的碎片離子，其準確定量完全依賴於色譜分離。優化後的MRM參數見表1。

二、色譜條件優化

研究首先比較了BEH C₁₈與HSS T3兩款色譜柱。結果表明，BEH C₁₈柱分離效果更優，成功實現了FB₂/FB₃和HFB₂/HFB₃兩對異構體的基線分離。進一步比較有機改性劑後發現，水-乙腈體係較水-甲醇體係峰形更尖銳，因此選用BEH C₁₈柱配合水-乙腈流動相。

流動相添加劑的選擇至關重要。不加添加劑或使用NH₄OH、乙酸時，FBs無法檢出；HFBs在不加添加劑時峰形拖尾嚴重，在NH₄OH條件下亦無法檢出。甲酸對FBs信號增強效果最佳，濃度從0.1%提高至0.5%時，FBs峰麵積平均提升40%。因此，最終選用水-乙腈（含0.5%甲酸）作為流動相。

針對FBs的殘留效應（高達5%），優化了進樣針清洗程序：清洗溶劑中添加0.5%甲酸，清洗時間從10秒延長至40秒，殘留降至0.5%以下。

樣品前處理優化

本研究針對驢血漿、尿液和糞便三種基質，分別優化了前處理流程，以簡便實用為原則，省略了複雜的SPE或IAC淨化步驟。

尿液基質複雜，直接稀釋-進樣導致信號抑製，故采用鹽析輔助液-液萃取（SALLE）。FBs需充分酸化才能轉移至有機相，10%高氯酸（PCA）酸化效果最佳，提取液濃度為原樣濃度。提

糞便經凍幹、粉碎後加水製成勻漿，同樣采用SALLE提取。10% PCA酸化可保證提取效率，最終實現15倍稀釋，平衡基質效應與靈敏度。

血漿中FBs濃度極低，SALLE法回收率偏低，改用稀釋-蒸發-進樣（DES）法。取溶劑中添加1%乙酸即可滿足要求，實現4倍濃縮，提取液經金剛1000溶劑蒸發工作站蒸幹後複溶，無顯著磷脂幹擾。

樣品前處理製備流程圖

方法驗證

本研究依據GB 5009.295-2023和SANTE/11312/2021指南，對方法進行了全麵驗證，評估指標包括選擇性、線性、靈敏度、基質效應、準確度、精密度和殘留效應。驗證結果表明，所有指標均符合指南要求，方法可靠、靈敏度高。

結論

本研究成功建立並驗證了一種同時定量驢血漿、尿液和糞便中三種伏馬菌素及其水解代謝物的LC-MS/MS方法。針對不同基質，分別采用鹽析輔助液-液萃取（SALLE）和稀釋-蒸發-進樣（DES）法進行前處理。方法驗證結果表明，該方法線性良好（R² ≥ 0.99）、準確可靠（回收率73.3%–111.5%，RSD < 20%），定量限滿足實際暴露水平檢測需求。

。該方法是首個在驢中實現多基質、多代謝物同步定量的分析技術，其中金剛1000溶劑蒸發工作站的引入顯著提升了樣品處理效率，為毒代動力學研究和暴露評估提供了可靠工具

參考文獻：Simultaneous Quantification of Fumonisins and Their Hydrolyzed Metabolites in Donkey Matrices: A Tool for Exposure Assessment and Toxicokinetic Studies

Dongying Tian 1,†, Yunduo Zheng 2,†, Yandong Li 3, Qianwen Xing 3, Gang Lin 4, Ronghua Zhu 4, Quigang Ma 2 , Peilong Wang 1 and Ruiguo Wang 1,*

http://www.mdpi.com/2072-6651/18/2/80

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